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牛乳サンプル中のテトラサイクリン抗生物質残留物を測定するための定性イムノアッセイと、それに続く定量的改良型 HPLC

Oct 11, 2023

Scientific Reports volume 12、記事番号: 14502 (2022) この記事を引用

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1 オルトメトリック

メトリクスの詳細

環境汚染は、人々や野生動物に害を及ぼすいくつかの問題の 1 つです。 現在発生している汚染物質の例としては、水や食品中に存在する可能性のある抗生物質の残留物があります。 抗生物質は人間や動物の感染症を治療または予防することを目的としていますが、成長と飼料効率を促進する能力があるため、動物の栄養補助食品としても使用されています。 この抗菌薬の過剰使用により、食品中に抗生物質の残留物が蓄積され、最終的には人間が消費します。 動物の飼料や乳を直接介して、または植物や土壌を介して間接的に抗生物質に人間が継続的に不必要に曝露されると、多剤耐性菌が出現する可能性が高まり、その結果人間の健康に悪影響を与える可能性があります。 抗生物質の使用に関して新しい規制が課されました。 サウジアラビアでは人間の消費を目的としたさまざまな種類の食品中の抗生物質の残留条件に関するデータが不足しているため、この研究では、動物の乳サンプル中のテトラサイクリン系抗生物質を特異的に検出するための、最適化されたクロマトグラフィー法 (HPLC-DAD) とその後に続くイムノアッセイアプローチを提案しました。 このメソッドは、pH 4 に調整された 0.01 M KH2PO4: アセトニトリル: メタノール (70:20:10、v/v/v) からなる移動相を備えた RP-C18 カラムを使用して実行されました。メソッドには次の点で改善が観察されました。解像度と感度です。 抽出に使用されたタンパク質沈殿法では、85 ~ 101% という高い回収率が実証されました。 この方法は、国際調和会議 (ICH) のガイドラインに従って検証されました。 これらの調査結果から、サウジ市場の乳製品中のテトラサイクリンおよびオキシテトラサイクリン抗生物質の残留量が最大残留限度値 (MRL) を下回っていることは明らかです。

環境汚染は、今世紀に世界が直面している課題です。 この問題は、「通常の環境プロセスに悪影響を与えるほどの、地球/大気系の物理的および生物学的構成要素の汚染」と定義されています1。 自然レベルを超えて存在する物質またはエネルギーは汚染物質とみなされます1。 残留抗生物質は、動物、植物、土壌に存在する環境汚染物質の 1 つであり、耐性微生物の発生を促進する可能性があります。 不必要な抗生物質の使用および抗生物質への曝露によって生じる微生物耐性は、いわゆる多剤耐性病原体に対する特定の抗生物質、あるクラスの抗生物質、または数種類の抗生物質に反応する細菌耐性機構の変化または新しい機構の発達として定義されます。 MDR)2. 抗菌活性を維持するために、規制当局は抗生物質の処方プロセスを制限しています。 しかし、抗生物質は獣医学での使用に加えて、牛や家禽の成長を促進し、生産性を高めるために食品保存料としても使用されています3、4、5。 これまでの研究では、動物の生産性を高めるために高レベルの抗生物質を使用することは、動物由来の食品に残留する抗生物質の存在と関連していることが証明されています6、7、8。 ヒトが抗生物質の残留物に継続的に曝露されると、アレルギー反応を発症したり、正常な腸内細菌叢を破壊したりする可能性が高まり、人体に有害となる可能性があり、また抗生物質耐性菌(ARB)や抗生物質耐性遺伝子(ARG)が動物からヒトに移入する可能性があります5。

テトラサイクリン (TTR)、クロルテトラサイクリン (CTC)、およびオキシテトラサイクリン (OXY) は、有効性と低コストのため、畜産で最も一般的に使用される抗生物質の 1 つです9,10。 多くの研究が、世界中でこれらの抗生物質の不適切な使用とそのような行為の結果を実証しています6,11。 たとえば、動物の混合飼料や食品産業における防腐剤としての抗生物質の管理されていない使用が存在します12、13。 さらに、新鮮な肉の保存期間を延ばすために、抗生物質が屠殺直前に動物に与えられたり、屠殺直後に頸動脈に注入されたりすることがよくあります12。 最終的には、残留抗生物質濃度が欧州連合 (EU) および世界保健機関 (WHO) が許可する最大残留限度 (MRL) を超える可能性があります。

 98.00%), chlortetracycline (> 95.00%) and the internal standard ornidazole (ORZ, > 99.00%) were purchased from Haoyuan ChemExpress Co., Ltd. (Shanghai, China). Potassium dihydrogen orthophosphate anhydrous (KH2PO4) was obtained from Loba Chemie Pvt. Ltd. (Mumbai, India). Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate (Na2EDTA) was obtained from Sigma–Aldrich Chemie Gmbh (Steinheim, Germany). Orthophosphoric acid (H3PO4) was obtained from Avonchem Ltd. (Cheshire, UK). The acetonitrile and methanol solvents in the mobile phase were of UHPLC and HPLC grade. Deionized water was used in all experiments. Milk samples were purchased from multiple local markets and farms in the city of Riyadh. Tetracycline Rapid Immunoassay test kits were obtained from Meizheng Biotech Group, a PerkinElmer company (Beijing, China). The HPLC system (Waters, Milford, MA, USA) consisted of a Waters 1525 binary HPLC pump, a Waters 2998 photodiode array detector, and a Waters 2707 autosampler. The data were acquired and processed using Waters Empower 3 software./p> 0.9998 for each drug, showing that the method is linear in the specified range. The concentrations used for the calibration curve were 0.09, 0.3, 0.5, 0.7, and 1 µg/mL./p>